技术介绍 | CO-IP检测服务
发布时间 2023-02-02
实验原理
细胞在非变性条件下被裂解时，细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白，那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离，对B蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。
技术应用
在体内验证两个蛋白质相互作用
在体内筛选和目的蛋白互作的未知蛋白
基本流程
优点
相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；
蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；
可分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。
缺点
可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；
两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而是第三者在中间起桥梁作用。
结果展示
结果分析
图示为验证蛋白A与蛋白B是是否存在相互作用的结果图。由图可以发现，该实验被分为两组：Input组及IP组。由Input组得到结论：蛋白A与蛋白B都是存在的。IP组中IgG是阴性对照，用于排除蛋白与抗体非特异性结合，蛋白A与蛋白B没有被沉淀下来；IP组protein A表示用蛋白A的抗体进行沉淀实验，结果蛋白A被沉淀下来，蛋白B也被沉淀下来，结论：蛋白A与蛋白B之间存在相互作用。
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