产品介绍
iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技术是分别由美国AB Sciex公司和Thermo公司研发的多肽体外标记定量技术，采用多种同位素的标签，可与氨基(包括氨基酸N端及赖氨酸侧链氨基)反应实现连接，通过高精度质谱分析，同时实现多个样本蛋白组的定性和定量。
iTRAQ/TMT试剂由三部分组成：报告基团、平衡基团和反应基团。反应基团形成2-18种等质量同位素标签。iTRAQ/TMT试剂标记酶解后的肽段的N端及赖氨酸侧链氨基。在MS/MS分析中，每个同量异序标签都能够产生一个独特的离子图谱，因此可以利用该标签进行定量。在一级质谱分析中，标记的多肽是无法彼此区分出来的。然而，在二级质谱模式下，报告基团、平衡基团和反应基团之间的键断裂，带不同同位素标签的同一肽段产生质量不同的报告离子。通过比较二级谱图中的不同报告离子的强度就可以对蛋白进行定量。
技术优势
◉ 适用范围广
可检测到的蛋白除了胞浆蛋白外，还有线粒体蛋白、膜蛋白和核蛋白。也能对任何类型的蛋白质进行鉴定，包括高分子量、酸性、碱性蛋白质。
◉ 高通量
一次可以实现多个样品的定性定量分析，特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间的样本的差异蛋白分析。
◉ 结果可靠
基于高灵敏度和高分辨的串联质谱方法，定性与定量同步进行，同时得出定性和定量结果，重复样品间的蛋白表达量相关性高。
◉ 灵敏度高
分级分离，降低样品复杂度，相比凝胶电泳观测到的蛋白变化在2倍以上，iTRAQ计算出的蛋白变化在通常1.3-1.6倍之间，可检测低丰度蛋白。
◉ 分离能力强
可分离出酸/碱性蛋白，小于10KDa或大于200KDa的蛋白、难溶性蛋白等。
◉ 自动化程度高
液质联用，自动化操作，分析速度快，分离效果好。
样本要求
动物及临床组织标本 | 50 mg/sample |
血清、血浆 | 200 μL/sample |
细胞、微生物 | 1×10^7cells/sample |
植物嫩叶、嫩芽 | 200 mg/sample |
植物种子、果实 | 500 mg/sample |
液氮或-80°C保存
足量干冰运输，避免反复冻融
检测平台
应用方向
◉ 疾病机制与标志物研究：解析疾病发生发展的关键蛋白与通路；筛选疾病诊断、进展及药物疗效预测标志物。
◉ 药物研发与机制解析：发现药物靶点，阐明药物作用通路与分子机制；评估药物副作用，优化药物设计。
◉ 蛋白质互作与网络分析：构建蛋白互作网络，解析细胞信号传导机制；鉴定蛋白复合物组成与功能动态变化。
◉ 农业与畜牧业研究：挖掘作物抗逆相关蛋白，优化畜禽饲养策略；探索农产品成熟贮藏机制，改良品质。
◉ 微生物与环境科学研究：解析微生物群落代谢功能与环境适应机制；评估污染物生态毒理效应，支撑环境治理。
◉ 基础生物学研究：探索细胞信号传导、周期分化调控机制；分析蛋白质翻译后修饰的功能调控作用。
案例应用
◉ 医学方向
英文标题：Extended Multiplexing of Tandem Mass Tags (TMT) Labeling Reveals Age and High Fat Diet Specific Proteome Changes in Mouse Epididymal Adipose Tissue
发表期刊： Molecular & Cellular Proteomics
影响因子： 6.54
技术方法： TMT标记定量蛋白质组学
研究内容：肥胖症是一种世界性流行病，与代谢并发症如2型糖尿病、高血压、血脂异常和动脉粥样硬化的发病率增加有关。过去由于缺乏有效的高通量技术手段限制了对附睾组织的整个脂肪组织蛋白质组变化的研究。因而作者利用多组高通量TMT标记定量蛋白组技术对小鼠附睾组织的蛋白质组进行了深入的研究。
研究路线：
◉ 生信分析
◉ 农学方向
英文标题： Integrative analysis of transcriptome and proteome provides insights into adaptation to cadmium stress in Sedum plumbizincicola
发表期刊：Ecotoxicology and Environmental Safety
影响因子：6.292
技术方法：TMT标记定量蛋白质组学
研究内容：镉(Cd)是对中国土壤安全威胁最严重的重金属污染物之一，可与植物必需元素竞争并转移到地上组织。它能引起植物DNA损伤，产生活性氧自由基，影响植物的生长和发育。伴矿景天(Sedum plumbizincicola)是具有镉超富集能力的植物之一，能在地上部组织中积累大量镉元素而不呈现毒害症状，在土壤重金属污染治理中具有重要应用价值。然而，调控这一过程的分子机制还不完全清楚。作者首次应用TMT定量蛋白质组技术并结合已报道的转录组学数据，探究伴矿景天对镉的耐受和积累的分子机制。
研究成果：
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