Copyright ©2018 上海阿趣生物科技有限公司 版权所有 沪ICP备17019578号-1

培养基消耗分析

浏览量:

 

 

 

 

1955年,Eagle博士发布了细胞基础培养基配方,指出培养基是”一个包含无机盐、糖、氨基酸、维生素及其他必须营养物质的等渗透压且具有pH缓冲能力的混合物”。作为细胞生长的环境和营养物质来源,对培养基的组成成分、投料化合物含量配比及其在细胞培养过程中含量变化进行检测具有重要意义。因此,几乎所有的生物制药公司、培养基生产商都不同程度的投入了大量的人力和物力开发培养基重要成分的检测方法。但是,目前培养基成分的检测过于复杂,需要使用不同的仪器、不同的方法进行测定,已不能满足工业化快速、标准化要求。而液质联用技术具有高通量,专属性强的特点,就能很好的解决这个问题。我们采用SCIEX公司推出的 “利用LC-MS/MS同时测定细胞上清液中106种化合物”方法来进行培养基中化合物的测定。

 

首先,该方法采用正负切换模式、一针进样即可在20分钟内实现细胞培养基/上清液中6种糖、39种氨基酸、19种维生素、18种核苷酸以及其他24种代谢相关物质共106种化合物的同时分析。其次,该方法为内标绝对定量方法,106种化合物的相关系数r均大于0.99,可获得长时间跨度的投料化合物样本的绝对浓度,易于比较;在没有标准品的情况下,也可将该方法应用于短时间或同批次样本的相对定量研究。最后,SCIEX独有的Scheduled MRM™模式,保证了所有化合物具有足够的扫描点数,从而保证峰形和灵敏度,方便增加更多的化合物。

 

表1. 标准物质列表

编号

分类

物质

数量

1

氨基酸

L-精氨酸,L-赖氨酸,L-亮氨酸,L-谷氨酸,L-蛋氨酸,L-丙氨酸等

39

2

核苷酸

胞苷,次黄苷,次黄嘌呤,鸟苷,鸟嘌呤,尿苷,尿嘧啶,腺苷,胸苷等

18

3

维生素

维生素B2, B3, B5, B6, B7, B9, B12;维生素C;维生素E;维生素D2

19

4

糖类

D-葡萄糖,D-蔗糖,L-来苏糖,L-苏糖酸钙等

6

5

抗生素

青霉素G

1

6

其他

柠檬酸,乳酸,丙酮酸,富马酸,乙二胺,组胺,腐胺等

23

 

       技术优势


1) MRM模式,高专属性,一种仪器即可完成糖类、氨基酸、维生素、有机酸等106种化合物的同时检测。

2) 采用正负切换模式,一针进样,仅需20 分钟。

3) 采用Scheduled MRM™模式,提供保留时间,保证峰形和灵敏度,后期方便增加更多化合物。

4) 灵敏度高,前处理简单,稀释进样。

5) 考察了106种化合物的线性范围,线性相关系数r均大于0.99。

6) 方法稳定:高盐溶液正负切换模式下仪器稳定,样品检测重现性好。

7) 内标法绝对定量,一种方法满足绝对定量和相对定量需求。

 

技术路线


>
>
培养基消耗分析